療效研究
益智康腦丸中當(dāng)歸對大鼠腦缺血損傷保護作用的實驗研究
日期:2012-12-27 16:16
湖北醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院(武漢430071)
德國柏林洪堡大學(xué)莎麗特醫(yī)學(xué)院神經(jīng)科
廖維靖 楊萬同 周云峰
摘要探討當(dāng)歸對大鼠腦缺血損傷是否具有保護作用。阻斷大鼠右頸總動脈和大腦中動脈90
min后恢復(fù)再灌,給予25%當(dāng)歸注射液7. 5 mL靜脈滴注6h。術(shù)后第8天用圖像處理技術(shù)測定腦梗死體積。結(jié)果顯示當(dāng)歸治療組梗死體積顯著小于實驗對照組。本實驗首次證實當(dāng)歸具有縮小腦梗死體積的作用,其作用機制待深人研究闡明。
關(guān)鍵詞腦缺血 當(dāng)歸 腦梗死
研究腦缺血損傷保護劑是國內(nèi)外一直關(guān)注的課題,有效且無副作用的神經(jīng)保護劑是中西醫(yī)共同追求的目標(biāo)。中醫(yī)活血化癖藥對腦缺血的保護作用引起西醫(yī)的興趣,活血化痕治則引起西方國家的重視。MEDLINE檢索迄今未見當(dāng)歸能否作為腦缺血損傷保護劑的系統(tǒng)實驗研究報道。為探討當(dāng)歸對腦缺血的保護作用,作者在德國洪堡大學(xué)莎麗特醫(yī)學(xué)院進行腦缺血損傷保護機制的合作研究時,在德方實驗室動物缺血模型的基礎(chǔ)上試用當(dāng)歸治療,同期觀察MK-801的作用,旨在探討當(dāng)歸對腦缺血損傷是否具有保護作用,并為今后從活血化窟藥中篩選腦保護劑及確定單一有效成分奠定基礎(chǔ)。
1材料和方法
1. 1動物造模:雄性Wistar大鼠32只,體重250-v300 g。所有動物均進行右頸總動脈(Carotid common artery,CCA)和大腦中動脈(Middle cerebral artery , MCA )短暫阻斷的手術(shù),隨機分為2組。一組不進行任何治療用作實驗對照組(13只);另一組采用當(dāng)歸治療(19只)。動物在Halothane持續(xù)麻醉下置于加熱墊上,將體溫探頭插人直腸測體溫。切開鼠尾,將塑料導(dǎo)管插人尾動脈后固定,測量術(shù)中血壓。切開頸部皮膚,暴露左頸靜脈,插人導(dǎo)管并固定。在背部皮膚穿一小孔將導(dǎo)管引出,放置備用。仔細分離肌肉暴露CCA用橡膠細管結(jié)扎。切開頭顱右MCA體表投影區(qū)皮膚,分離肌肉。用顱鉆鉆孔后,小心刺破硬腦膜并剝離。用弧型絲鉤提起MCA,并用固定力量牽拉造成MCA短暫阻斷,持續(xù)90min。小心將MCA放回原處恢復(fù)再灌,縫合皮膚。松開結(jié)扎CCA的橡膠管,縫合皮膚。術(shù)中測體溫、血壓、血糖、血氧、血二氧化碳分壓、血酸堿度等生理參數(shù),體溫維持在(37士0.5)`C。
1. 2給藥:25%當(dāng)歸注射液,湖北醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院藥廠生產(chǎn),批號分別為940614,970214和970924。將7. 5 mL當(dāng)歸注射液加人固定壓力注射泵,調(diào)定速度,6h滴注完畢。滴注中每2h測體溫。剪去暴露體表的導(dǎo)管,牢固結(jié)扎后膠布固定。
1. 3取材:術(shù)后第一天評定肢體功能,測體溫、血糖、血細胞壓積,其后每天測體溫,第8ti U C:冰相儲放侍處埋。一G U L'但伶相甲冠樸連續(xù)切片,片厚40 um。將每20片中的第1.2張貼于一張玻璃片。每腦約做20張玻片。切片干燥過夜,酸性復(fù)紅染色,梯度乙醇弱水,封片。采用德國Polaroid圖像處理系統(tǒng)(Sprint Scan 35 Plus)測量每張切片的面私(mmZ)。觀察有梗死的切片張數(shù)可計算出校死的長度,算出梗死的體積,單位為mm3 01. 4統(tǒng)計處理:實驗數(shù)據(jù)用(x士:)表示,轅人Excel 7. 0軟件進行t檢驗。
2結(jié)果
實驗對照組13只動物,1例因梗死灶出血體積顯著大而被剔除,1例因梗死灶體積小于6 mm3剔除。這2例可能是手術(shù)誤差所致。治療組動物死亡5例,1例因梗死灶出血被剔除,1例也因體積小于6 mm“被剔除。統(tǒng)計分析時對照組實際例數(shù)是n只,治療組12只。940614批號動物4只,970214批號7只,970924批號4只。術(shù)中、術(shù)后生理參數(shù)變化未見顯著性差異,術(shù)后第1.8天肢體功能未見顯著性差異。對照組、治療組腦梗死體積變化見表1。
結(jié)果顯示當(dāng)歸對腦缺血損傷具有保護作用。與MK-801縮小梗死的結(jié)果相比,當(dāng)歸
3討論
測定梗死面/體積是觀察梗死大小最直接客觀的指標(biāo),體積指標(biāo)較面積準(zhǔn)確,用計算機進行圖像處理更易做到精確量化。深人研究應(yīng)觀察功能、代謝指標(biāo)以全面反映梗死變化。采用缺血/再灌模型較完全阻斷血供的模型更能模擬人體發(fā)病的情況。術(shù)后第8天是梗死發(fā)展成最大的時間,且組織水腫消除,此時測定梗死體積最準(zhǔn)確。
近年研究認為腦缺血損傷的病理生理機制是損傷級聯(lián)反應(yīng),即興奮性毒性、梗死周圍去極化、炎癥和程序性細胞死亡4個過程[m鈣、谷氨酸、氧自由基、NO等涉及這些過程。中醫(yī)認為缺血是察癥,其治則為化瘓,活血是化癖的前提。MEDLINE檢索迄今未見當(dāng)歸作腦保護劑的研究。本文結(jié)果首次顯示當(dāng)歸具有縮小腦梗死體積的作用。文獻報道當(dāng)歸能夠清除自由基川,本實驗可能是當(dāng)歸清除自由基的作用結(jié)果。當(dāng)歸注射液的成分超過40種仁3J,當(dāng)歸成分之一的阿魏酸(ferulicacid)具有抗氧化損傷的作用C s7,本結(jié)果是否為阿魏酸的作用有待證實。
本實驗預(yù)實驗時,不同批號(次)的藥液縮小梗塞的差異較大,可能與中藥制劑質(zhì)量不穩(wěn)定有關(guān),也可能是手術(shù)本身的原因。本實驗所用劑量是通常文獻報告劑量的一半,這是依動物實際體重、給藥方式及便利而定,并非最適劑量。一次給藥方法與傳統(tǒng)的每天給藥習(xí)慣不同,以便跟MK-801進行比較,結(jié)果提示當(dāng)歸潛在的保護作用相當(dāng)大,同時說明藥物療效不一定是治療時間越長越好,劑量越大越好。