扶芳藤對(duì)兔心肌缺血再灌注損傷血清SOD MDA的影響

扶芳藤對(duì)兔心肌缺血再灌注損傷血清SOD、MDA的影響

李成林 王慶高 廣西中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院

530022 南寧市東葛路89-9號(hào)

崔勝利 廣西中醫(yī)學(xué)院

2008級(jí)碩士研究生 530001

摘 要 目的：觀察扶芳藤對(duì)兔心肌缺血再灌注損傷自由基的影響。 方法：將48只健康家兔隨機(jī)分為假手術(shù)組(A組)、缺血再灌注模型組(B組)、卡托普利對(duì)照組(C組)、扶芳藤大劑量組(3.6 g/kg)(D組)、扶芳藤中劑量組(1.8 g/kg)(E組)、扶芳藤小劑量組(0.9 g/kg)(F組)，每組8只。 采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性，用硫代巴比妥酸法測(cè)丙二醛(MDA)含量。

結(jié)果：模型組在缺血30 min及再灌注后SOD的活性顯著降低，MDA含量明顯增加，與假手術(shù)組比較有顯著性差異(P<0.01);與模型組比較，用藥各組在相應(yīng)時(shí)段均有明顯降低MDA含量及提高SOD活力的作用(P<0.01);其中扶芳藤大劑量作用優(yōu)于卡托普利組(P<0.01或P<0.05)，中劑量組與卡托普利作用相當(dāng)(P>0.05)。

結(jié)論：扶芳藤通過清除氧自由基，抑制了脂質(zhì)體的氧化，從而對(duì)心肌缺血再灌注損傷起到了保護(hù)作用，尤其以扶芳藤大劑量組表現(xiàn)更為明顯。

關(guān)鍵詞 扶芳藤;心肌缺血再灌注損傷;超氧化物歧化酶(SOD);丙二醛(MDA)

扶芳藤Evonymus fortunei E-and.-mazz.為衛(wèi)矛科植物扶芳藤的莖葉，具有舒筋活絡(luò)、止血瘀的功效[1]。近年來有研究指出，扶芳藤有較強(qiáng)的抗氧化作用，具有防治腦缺血相關(guān)疾病的作用[2]，對(duì)心血管有良好的藥理作用[3]。臨床上其復(fù)方制劑復(fù)方扶芳藤合劑(原名百年樂)作為防治老年心血管疾病的輔助治療藥物已被廣泛應(yīng)用。

本課題之前已報(bào)道了扶芳藤通過減少Bax蛋白的表達(dá)，升高Bcl-2，抑制再灌注心肌細(xì)胞凋亡，從而對(duì)心肌缺血再灌注損傷(I/R)起到保護(hù)作用[4]。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步觀察了扶芳藤對(duì)家兔心肌缺血再灌注模型血清中超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛(MDA)等指標(biāo)的影響，從另一角度探討其對(duì)心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與儀器

1.1 扶芳藤水煎液的制備

扶芳藤干燥莖葉由廣西中醫(yī)學(xué)院制藥廠提供，并經(jīng)該廠質(zhì)檢科鑒定。取扶芳藤2 kg切碎，加入適量蒸餾水，煎煮2次，第一次煎煮2 h，第二次煎煮1 h，將2次煎煮的藥液合并在一起，過濾(200目篩網(wǎng))后濃縮至200 ml，制成含生藥10 g/ml的藥液。

1.2 藥品

卡托普利，由江蘇常州制藥廠生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H32023731。

1.3試劑儀器

SOD及MDA試劑盒(購自南京建成生物工程研究所);TU 1901紫外分光光度計(jì)上海棱普儀器儀表有限公司);SSW-420-2S電熱恒溫水浴箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司);PRO200組織勻漿器(美國);泰盟科技BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng);泰盟科技HX-300S動(dòng)

物呼吸機(jī);北京醫(yī)用離心機(jī)制造LDZ4-0.8自動(dòng)平衡微型離心機(jī)。

1.4 動(dòng)物

新西蘭大白兔，雌雄不限，雌無孕，體重2.5～3 kg，由廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組與給藥

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按查隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為A、B、C、D、E、F6組，每組8只。A為假手術(shù)組，B為模型組，C為卡托普利對(duì)照組(10 mg/kg)，D為扶芳藤大劑量組(3.6 g/kg)，E為扶芳中劑量組(1.8 g/kg)，F(xiàn)為扶芳藤小劑量組(0.9 g/kg)。分籠飼養(yǎng)，自由飲食，于每天早上點(diǎn)灌胃給藥，假手術(shù)組和模型組予蒸餾水灌胃。劑量是根據(jù)成人每日臨床用量按人與動(dòng)物之

間藥物劑量換算而成[5]。給藥7 d，末次給藥1 h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.2 心肌缺血再灌注損傷模型的制備[6]

予20%烏拉坦5 ml/kg經(jīng)耳緣靜脈注射麻醉后，背位固定，氣管切開，連接微型人工呼吸機(jī)(潮氣量21 ml，頻率30～40次/分)。沿胸骨左緣第2～4肋間開胸，暴露心臟，剪開心包膜，用小棉球?qū)⑿呐K向右邊輕推，在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐之間找到與左冠狀動(dòng)脈伴行的心大靜脈，用止血鉗輕輕提起左心耳，于左心耳下方用醫(yī)用眼科針，3/0號(hào)絲線穿線，將一細(xì)小醫(yī)用硅膠管(直徑約2 mm) 墊于血管與結(jié)扎線之間，連同心大靜脈一起結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，深度約2 mm，盡量減少對(duì)心肌的創(chuàng)傷。結(jié)扎40 min后剪線松開行再灌注40 min。以結(jié)扎后心電圖ST段弓背樣抬高>0.1 mV以上，同時(shí)左室前壁紫紺作為判定缺血成功的

標(biāo)準(zhǔn);松開結(jié)扎線后20 min內(nèi)ST段下降>1/2幅度，左室前壁缺血區(qū)紫紺消失作為再灌注成功的標(biāo)準(zhǔn)。假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎，余操作同上。

2.3 血清中SOD，MDA的檢測(cè)

分別于缺血前、缺血后30 min、再灌注后30 min、再灌注后120 min自兔頸總動(dòng)脈采血4 ml，各時(shí)點(diǎn)血液1500 rpm離心10 min，分離血清。采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)血清超氧化物歧化酶(SOD)活性，用硫代巴比妥酸法測(cè)丙二醛(MDA)含量，操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。

2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，多組間比較用方差分析，組間比較用q檢驗(yàn)。全

部數(shù)據(jù)采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組血清 SOD 活性的測(cè)定

由表1可以看出：缺血前各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清SOD活力沒有顯著性差異(P>0.05)。假手術(shù)對(duì)照組血清SOD活性在實(shí)驗(yàn)過程中的變化無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。模型組血清SOD活性于缺血30 min出現(xiàn)明顯下降，與假手術(shù)對(duì)照組比較差異有顯著性意義(P<0.01);再灌注發(fā)生后，再灌注30min、再灌注120min兩個(gè)時(shí)段血清SOD活性與缺血30min時(shí)相比均降低，其中以缺血再灌注120 min時(shí)降低最為明顯，表明再灌注進(jìn)一步降低了血清SOD活性。與模型組比較，3個(gè)時(shí)間觀測(cè)點(diǎn)各用藥組的血清SOD活性均明顯升高(P<0.01)。與卡托普利對(duì)照組比較，扶芳藤大劑量組在3個(gè)時(shí)間觀測(cè)點(diǎn)均能明顯升高血清SOD的活性(P<0.01);中劑量組血清SOD活性與卡托普利組比較，無顯著性差異(P>0.05)。

3.2各組血清MDA含量的測(cè)定

由表2可以看出：缺血前各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清MDA含量沒有顯著性差異(P>0.05);假手術(shù)組血清MDA的含量在實(shí)驗(yàn)過程中變化不明顯;模型組血清MDA含量于缺血30 min出現(xiàn)明顯升高(P<0.01);再灌注發(fā)生后MDA含量逐漸升高，其中以缺血再灌注120 min時(shí)升高最為明顯，說明再灌注進(jìn)一步升高了血清中MDA的含量。與模型組比較，在3個(gè)時(shí)間觀測(cè)點(diǎn)各用藥組血清MDA含量均明顯降低(P<0.01)。與卡托普利對(duì)照組比較，扶芳藤大劑量組在3個(gè)時(shí)間觀測(cè)點(diǎn)的血清MDA含量均顯著下降(P<0.05或P<0.01);中劑量組血清MDA含量與卡托普利組比較，無顯著性差異(P>0.05)。

4 討 論

扶芳藤入藥首載于《本草拾遺》“扶芳藤，味苦，小溫，無毒，主一切血，一切氣，一切冷，去百病，久服延年，變白，不老……大主風(fēng)血”，可用于治療風(fēng)濕痹痛、腰肌勞損、吐血、血崩、創(chuàng)傷出血、月經(jīng)不調(diào)、血瘀閉經(jīng)、跌打骨折等癥，主要以莖葉入藥，全年可采，屬廣西民間草藥。

前期研究結(jié)果表明，扶芳藤具有良好的心血管藥理作用，可延長小鼠心肌缺血的存活時(shí)間，抑制血栓形成，改善去甲腎上腺素(NA) 所致的腸系膜微循環(huán)障礙，并可擴(kuò)張氧耳廓微血管[3]，具有擴(kuò)張血管平滑肌和降血壓作用[7]。心肌缺血再灌注損傷的機(jī)制普遍認(rèn)為與心肌的能量代謝障礙、氧自由基的大量產(chǎn)生、細(xì)胞內(nèi)鈣離子的超載、血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的一系列內(nèi)皮因子等因素有關(guān)。氧自由基的大量產(chǎn)生使心肌組織的脂質(zhì)體(LPO)增多，心肌組織丙二醛(MDA)的含量增加，從而引起心肌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的改變，心肌細(xì)胞受到損傷。因此，MDA是反映心肌氧自由基損傷的直接指標(biāo)，而SOD是清除氧自由基的重要酶類，可減輕氧自由基對(duì)心肌細(xì)胞的損傷作用。

本研究結(jié)果顯示，心肌缺血30 min后模型組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清SOD活性較假手術(shù)組明顯降低，MDA明顯增高;隨著再灌注的發(fā)生和發(fā)展，SOD活性較缺血期降低更顯著，MDA進(jìn)一步增高，說明缺血再灌注加劇了心肌的損傷。與模型組比較，C，D，E，F(xiàn)組在相應(yīng)時(shí)段均有明顯降低MDA含量及提高SOD活力的作用(P<0.01);其中扶芳藤大劑量作用優(yōu)于卡托普利(P<0.01或P<0.05)，而中劑量與卡托普利作用相當(dāng)(P>0.05)。

結(jié)果表明，扶芳藤可通過提高SOD的活性，降低氧自由基的產(chǎn)生，抑制了脂質(zhì)體的過氧化，從而對(duì)心肌缺血再灌注損傷起到了保護(hù)作用，此作用以扶芳藤大劑量組最為明顯。